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細胞學堂 | BV2細胞形態問題大揭秘

更新時間:2024-01-25  |  點擊率:153
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BV2細胞系由E·Blasi于1990年建立,應用小鼠小神經膠質細胞經逆轉錄病毒介導轉染v-raf/v-myc獲得永生化,在模擬神經系統疾病和研究相關疾病機制方面應用廣泛。BV2細胞保留有小神經膠質細胞多種形態、表征和功能特征,免疫組化結果顯示,BV2細胞為MAC1、MAC2陽性,MAC3、膠質細胞原纖維酸性蛋白、半乳糖腦苷脂陰性。





培養BV2細胞時,最常遇到的問題就是細胞形態異常,通常伴隨著細胞形狀改變、拉絲較多等,對大家的實驗造成影響。本期細胞學堂為大家整理了BV2細胞的培養方法、常見問題及處理方法,幫助您快速上手開展實驗。




細胞生長特性

① 半貼半懸:懸浮和貼壁細胞比例不固定;

② 多形性:懸浮細胞為圓形,貼壁細胞既有圓形(飽滿圓潤,邊緣亮)也有梭形(向兩端伸出黑色突起)、多邊形。


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BV2細胞顯微鏡圖





培養方法

培養條件

氣相:空氣,95%;CO2,5%;

溫度:37℃;

細胞形態

上皮細胞樣;

凍存條件

凍存液:55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

溫度:液氮



BV2細胞的傳代

01

用移液器吸出細胞培養瓶中的培養液(含有懸浮細胞),轉移到無菌離心管A中;

02

用1 mL PBS潤洗細胞,吸出PBS放入到上一步裝有培養液的離心管A中;

03

培養瓶中加入1 mL胰酶,輕輕晃動培養瓶使胰酶浸潤所有細胞,放入37℃培養箱靜置消化(消化時間跟據細胞生長時間稍有不同,消化時間一般為2~4 min,可以消化1 min后拿出來在顯微鏡下觀察,若還未消化完-全就放回培養箱繼續消化,直到顯微鏡下看到細胞明顯分離變圓,側立培養瓶細胞有滑落跡象,可終止消化),全程不要拍打培養瓶;

04

培養瓶中加入3 mL含血清的培養基終止消化,輕輕吹幾下將細胞吹落到液體中,再輕吹5~10下使細胞均勻分散,盡量在顯微鏡下呈單顆懸??;

05

將培養瓶中的細胞懸液轉移至離心管A中,1200 rpm離心3 min;

06

棄上清,加入2~3 mL新鮮培養基重懸沉淀,按傳代比例分裝到新的培養瓶或者皿中,補足培養基,最后輕吹幾下讓細胞分散均勻。

 注意事項 


BV2細胞是半貼壁半懸浮細胞,懸浮細胞和貼壁細胞的比例不固定,因此傳代的時候需要單獨收集懸浮和貼壁部分的細胞進行處理。如果懸浮的細胞不到10%,貼壁的細胞密度有80%以上,這個情況傳代的時候也可以不收集懸浮細胞。


BV2細胞的凍存

凍存液推薦配比:

55%(基礎培養基)+40%(血清)+5%(DMSO)或90%胎牛血清+10%DMSO;

 注意事項 


細胞到貨穩定培養2~3代后,建議及時凍存保種,推薦凍存密度2~3×106 cells/mL。由于細胞凍存成功率往往無法達到百分-之百,一般建議邊傳代邊凍存,每次凍存后需復蘇一支凍存管驗證細胞活率。






培養常見問題及處理方法

01

剛收到貨時,細胞整體偏圓形較多,而后續培養時梭形較多是怎么回事?

細胞形態會隨著密度的改變發生變化。BV2細胞增殖較快,到貨時由于運輸震蕩的原因,部分細胞會出現收縮,此時細胞密度較高,圓形相對較多;在后續培養中,按照1:2~1:4傳代24 h時,細胞主要以梭形為主;后續隨著細胞密度越來越高,圓形細胞會逐漸變多。




02

傳代培養時,發現細胞拉絲、觸角較多,如何調整?

BV2細胞以較低密度傳代后,容易出現拉絲、觸角較多的情況。這種情況可以先收集培養基中懸浮或貼壁不牢的細胞于15 mL離心管中,貼壁的細胞用胰酶消化1 min左右后終止消化,收集消化下來的的細胞(多觸角或者拉絲很長的細胞,短時消化不容易消化下來,可以被篩掉),然后計數傳代,培養一段時間后細胞狀態會有好轉。沒有消化下來的細胞也可以提高細胞密度傳代,重復此步驟,收集偏圓形的細胞培養。




03

培養過程梭型細胞比圓形細胞多,梭型是不是細胞分化了?

細胞受到LPS刺激后易分化,而常規培養過程是不會自發分化的。關于哪種形態是分化,并沒有統一的定論,有的文獻描述分化細胞是長梭型細胞增加,有的文獻稱分化細胞偏圓形,建議通過檢測相關的指標變化來判斷是否分化。



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