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細胞凋亡的幾種檢測方法

更新時間:2024-01-24  |  點擊率:165
細胞凋亡的幾種檢測方法:
一  形態學觀察方法
1、HE染色、光鏡觀察:凋亡細胞呈圓形,胞核深染,胞質濃縮,染色質成團塊狀,細胞表面有“出芽”現象。
2、丫啶橙(AO)染色,熒光顯微鏡觀察:活細胞核呈黃綠色熒光,胞質呈紅色熒光。凋亡細胞核染色質呈黃綠色濃聚在核膜內側,可見細胞膜呈泡狀膨出及凋亡小體。
3、臺盼藍染色:如果細胞膜不完整、破裂,臺盼藍染料進入細胞,細胞變藍,即為壞死。如果細胞膜完整,細胞不為臺盼藍染色,則為正常細胞或凋亡細胞。此方法對反映細胞膜的完整性,區別壞死細胞有一定的幫助。
4、透射電鏡觀察:可見凋亡細胞表面微絨毛消失,核染色質固縮、邊集,常呈新月形,核膜皺褶,胞質緊實,細胞器集中,胞膜起泡或出“芽”及凋亡小體和凋亡小體被臨近巨噬細胞吞噬現象。
二、DNA凝膠電泳
(一)、檢測原理
細胞發生凋亡或壞死,其細胞DNA均發生斷裂,細胞內小分子量DN**斷增加,高分子DNA減少,胞質內出現DN**斷。但凋亡細胞DNA斷裂點均有規律的發生在核小體之間,出現180-200bpDN**斷,而壞死細胞的DNA斷裂點為無特征的雜亂片斷,利用此特征可以確定群體細胞的死亡,并可與壞死細胞區別。
(二)結果判斷
正?;罴毎鸇NA 電泳出現階梯狀(LADDER)條帶;壞死細胞DNA電泳類似血抹片時的連續性條帶。
三、酶聯**吸附法(ELISA)核小體測定
凋亡細胞的DNA斷裂使細胞質內出現核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DN**斷組成,可由ELISA法檢測。
(一)檢測步驟
1、將凋亡細胞裂解后高速離心,其上清液中含有核小體;
2、在微定量板上吸附組蛋白體’
3、加上清夜使抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結合‘
4、加辣過氧化物酶標記的抗DNA抗體使之與核小體上的DNA結合’
4、加酶的底物,測光吸收制。
(二)用途
該法敏感性高,可檢測5*100/ml個凋亡細胞??捎糜谌?、大鼠、小鼠的凋亡檢測。該法不需要特殊儀器,適合基層工作,但是不能**測定凋亡細胞發生的絕多對量。
四、流式細胞儀定量分析
(一)檢測原理
細胞發生凋亡時,其細胞膜的通透性也增加,但是其程度介于正常細胞與壞死細胞之間。利用這一特點,被檢測細胞懸液用熒光素染色,利用流式細胞儀測量細胞懸液中細胞熒光強度來區分正常細胞、壞死細胞核凋亡細胞。
(二)應用價值
   

 

 
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