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細胞學堂 | 實驗室細胞計數指南

更新時間:2023-12-19  |  點擊率:285
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細胞計數是實驗室中常見的一項操作,用于確定樣品中細胞的數量,判斷細胞數量是否滿足實驗需求。本期細胞學堂為大家整理了幾種常見的計數方法:人工手動計數法、自動細胞計數儀法,以及懸浮細胞和貼壁細胞在不同密度下的鏡下視野的參考范圍,幫助您快速上手開展實驗。




1

人工手動計數法


即通過肉眼觀察顯微鏡視野中的細胞數量,從而進行統計。

  操作步驟   

1

將計數板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計數板上;

2

輕輕吹打細胞懸液,使細胞均勻分布;吸出10μL-20μL左右的細胞懸液滴在蓋片邊緣,使細胞懸液充滿蓋玻片和計數板之間;

3

靜置1min-2min,使細胞沉降;注意玻片下不要有氣泡,也避免細胞懸液進入旁邊的槽中;

4

在顯微鏡下對A/B/C/D四個大格內的細胞進行計數,壓在大格四周邊線上的細胞只計數壓在2條邊線上的細胞(如左側和上方);若鏡下有2個細胞組成的細胞團,則應按單個細胞計算;若細胞團數量較多,占細胞總量的10%左右,則說明細胞分散不好會導致計算不準確,需要重新制備細胞懸液,細胞量較多的時候,需要借助計數器;

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按公式計數細胞數量:細胞數/mL=四個大格內細胞總數(每個大格共計16個小格)×104/4。


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2

自動細胞計數儀法


即通過儀器進行計數,例如血細胞計數儀或顯微鏡配備的圖像分析系統。這些設備能夠自動識別和計數細胞,提高計數的準確性和效率。

  操作步驟   

1

將計數板及蓋玻片擦拭干凈,并將蓋玻片蓋在計數板上;

2

輕輕吹打細胞懸液,使細胞均勻分布;吸出少許細胞懸液滴在蓋片邊緣,使細胞懸液充滿蓋玻片和計數板之間;

3

靜置1min-2min,使細胞沉降;注意蓋玻片下不要有氣泡,也避免細胞懸液進入旁邊的槽中;

4

將計數板放置在儀器中,按要求設置參數,儀器自動計數;

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3

基于鏡下密度估計細胞密度


在實際細胞培養過程中,若沒有計數條件或者對于細胞數量不要求定量,也可基于肉眼去觀察鏡下的細胞密度去估計細胞是否可以傳代。以下是懸浮細胞和貼壁細胞不同密度下的鏡下視野可以給大家作為參考。(需要注意的是,不同大小的細胞,密度值是有差異的,這里列舉的是較常見的例子)

  01 貼壁細胞的密度參考     

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顯微鏡下不同密度的貼壁細胞

  02 懸浮細胞的密度參考     

懸浮細胞接種到T25的瓶子里混勻后,在顯微鏡下靜置3min-5min后,拍照得到:(懸浮細胞在移動的時候,細胞會像向中間移動,導致密度不均)

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K562細胞混勻靜置3~5分鐘后拍照(100X拍攝)


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K562細胞混勻靜置3~5分鐘后拍照(200X拍攝)






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